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發(fā)布時(shí)間： 2022-11-29 點(diǎn)擊次數(shù)： 1187次DNA提取技術(shù)服務(wù)是一種使用破壁酶(Lyticase)消化去除酵母細(xì)胞壁，然后采用一種新型的酵母質(zhì)粒純化柱實(shí)現(xiàn)從酵母細(xì)胞中進(jìn)行小量質(zhì)?？焖俪樘岬脑噭┖?。DNA提取技術(shù)服務(wù)本實(shí)驗(yàn)方法的基本原理是，在高鹽狀態(tài)下，硅膠膜專(zhuān)一性地吸附DNA；而在低鹽或水溶液狀態(tài)下，DNA被洗脫下來(lái)。此法簡(jiǎn)便快捷，可在30分鐘內(nèi)同時(shí)提純二十多個(gè)樣品。從3～5ml培養(yǎng)過(guò)夜的含高拷貝質(zhì)粒的菌液中可以獲得10～20μg高純度的質(zhì)粒DNA，用于酶切、轉(zhuǎn)化、DNA自動(dòng)測(cè)序和手工測(cè)序等。DNA提取主要是CTAB方法，其他的方法還有物理方式如玻璃珠法、超聲波法、研磨法、凍融法?；瘜W(xué)方式如異硫氰酸胍法、堿裂解法。生物方式:酶法。根據(jù)核酸分離純化方式的不同有硅質(zhì)材料、陰離子交換樹(shù)脂等。DNA提取方法：1、酚抽提法:先用蛋酶K、SDS破碎細(xì)胞，消化蛋白，然后用酚和酚-氯萃取，高速離心后取上清，所得DNA大小為100-150kb2、甲酰胺解聚法:破碎細(xì)胞同上，然后用高濃度甲酰胺解聚蛋白質(zhì)與DNA的結(jié)合，再透析獲得DNA可得DNA200kb左右。3、玻璃棒纏繞法:用鹽酸胍裂解細(xì)胞，將裂解物鋪于乙醇上，然后用帶鉤或U型玻璃棒在界面輕攪，DNA沉淀液繞于玻棒。生成DNA約80kb。4、異丙醇沉淀法:基本同1法，僅用二倍容積異丙醇替代乙醇，可去除小分子RNA(在異丙醇中可溶狀態(tài))5、表面活性劑快速制備法:用TritonX-100A或NP40表面活性劑破碎細(xì)胞，然后用蛋白酶K或酚去除蛋白，乙醇沉淀或透析。6、加熱法快速制備:加熱96℃-100℃，五分鐘，然后離心后取上清，可用于PCR反應(yīng)。7、堿變性快速制備:先用NaOH作用20分鐘，再加HCI中和，離心后取上清，含少量DNA。
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