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流式JC-1檢測(cè)實(shí)驗(yàn)服務(wù)
更新時(shí)間:2024-07-26
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廠商性質(zhì):其他
JC-1線粒體膜電位熒光探針染色步驟(流式細(xì)胞儀法):
1. 于6-,12或24-孔板上進(jìn)行細(xì)胞鋪板,密度為5×105 cells/mL。37℃,5% CO2培養(yǎng)箱培養(yǎng)過(guò)夜。選擇合適的化合物根據(jù)特定的步驟進(jìn)行凋亡誘導(dǎo)。 注:進(jìn)行凋亡誘導(dǎo)時(shí)的細(xì)胞密度建議不超過(guò)1×106 cells/mL,也可根據(jù)自己的細(xì)胞類型培養(yǎng)至合適的密度。
2. 取0.5 mL細(xì)胞懸液至無(wú)菌的離心管內(nèi);
3. 室溫條件400 x g離心5 min;吸掉上清。
4. 用0.5 mL JC-1工作液重懸細(xì)胞,于37℃,5%CO2培養(yǎng)箱孵育15-30 min;注意:一般情況,15 min足以進(jìn)行充分的染色。
5. 室溫條件400 x g離心5 min;吸掉上清;
6. 用2 mL細(xì)胞培養(yǎng)液或者緩沖液重懸細(xì)胞,之后室溫條件400 x g離心5 min;吸掉上清;
7. 重復(fù)步驟6);
8. 用0.5 mL新鮮培養(yǎng)液或者緩沖液重懸細(xì)胞,即可進(jìn)行后續(xù)的流式分析。注意:請(qǐng)馬上進(jìn)行流式定量分析,此細(xì)節(jié)很重要。
數(shù)據(jù)分析:含有紅色JC-1聚集物的健康細(xì)胞線粒體用FL2通道檢測(cè);含有綠色JC-1單體的凋亡或不健康細(xì)胞用FL1(FITC)通道檢測(cè)。